JEG-3/VP16人绒癌细胞耐药株

一、细胞来源与耐药特性

JEG-3/VP16人绒癌细胞耐药株是由亲本 JEG-3 人绒癌细胞经 VP16 逐步浓度诱导建立的耐药细胞模型，专门用于研究绒癌对 VP16 耐药的分子机制及耐药逆转策略。该细胞通过长期暴露于低剂量 VP16 环境，逐步获得稳定耐药表型，其对 VP16 的半数抑制浓度（IC??）较亲本细胞提升 8-12 倍，且耐药特性可在无药物选择压力下维持 50 代以上，为绒癌耐药相关研究提供了稳定可靠的体外工具。

二、核心生物学特征

形态上，该耐药株仍保留上皮样形态，胞体呈多边形或不规则形，但相较于亲本细胞，胞质更丰富，细胞核体积略大，核仁数量增加，部分细胞出现多核现象，体外培养以贴壁生长为主，呈片状排列，无接触抑制，细胞融合度达 85%-95% 时仍可增殖。生长特性方面，其增殖速率较亲本细胞稍慢，倍增时间约 48-60 小时，常规培养下可稳定传代，且保留绒癌特异性分泌功能，该分泌指标可作为评估细胞功能状态的重要依据，但其分泌水平较亲本细胞降低 15%-20%。

分子特征上，该耐药株呈现典型耐药相关表型：高表达多药耐药蛋白 1（MDR1/ABCB1）、多药耐药相关蛋白 2（MRP2/ABCC2）等药物外排泵，通过主动将细胞内 VP16 排出，降低药物蓄积浓度；同时，细胞内 DNA 修复相关蛋白（如 XRCC1、Ku70）表达上调，增强对 VP16 诱导的 DNA 损伤的修复能力；此外，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达升高，促凋亡蛋白 Bax 表达降低，抑制药物诱导的细胞凋亡，这些分子变化共同构成其耐药机制的核心。

三、体外培养关键条件

该耐药株的体外培养需在亲本细胞基础上优化条件，以维持耐药特性：培养基shou选含高糖（4.5g/L D - 葡萄糖）的 DMEM/F12 混合培养基，添加 12%-15% 胎牛血清（FBS）及 1% 非必需氨基酸（NEAA），为维持耐药表型，可在培养基中添加低剂量 VP16（终浓度 10-20 ng/mL），避免耐药特性丢失；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压维持 290-310 mOsm/kg。

培养环境需稳定在 37℃、5% CO?及饱和湿度，CO?浓度波动≤±0.3%，温度偏差超 ±1℃会导致细胞贴壁能力下降。传代操作与亲本细胞类似：细胞融合度达 70%-80% 时，用无菌 PBS 清洗 2 次，加入含 EDTA 的细胞消化液，37℃孵育 2-3 分钟至细胞变圆，加血清培养基终止消化，按 1:3-1:4 比例接种，需避免消化过度，传代后 24 小时内不移动培养瓶，确保细胞稳定贴壁。

四、核心科研应用领域

五、质量控制与使用注意事项

合格的耐药株需满足：细胞活力≥88%（台盼蓝染色），无细菌、真菌、支原体污染；对 VP16 的 IC??符合耐药标准，MDR1、MRP2 表达阳性；特异性分泌功能稳定（培养上清中该分泌指标浓度达标），染色体核型与亲本细胞一致。

使用时注意：传代次数控制在 45 代内，超代次可能导致耐药性下降；若长期无药培养，需每 10 代用低剂量 VP16 复筛，维持耐药表型；冻存用含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM/F12 冻存液，梯度降温后液氮保存，复苏后 48 小时再换液，确保细胞恢复活性。