QGY-7701人肝癌细胞

QGY-7701人肝癌细胞是源自人类原发性肝细胞癌组织的贴壁生长细胞系，因稳定保留肝癌细胞的恶性生物学特征，且体外培养稳定性高、实验重复性好，成为研究肝癌发生发展机制、肿瘤侵袭转移及药物筛选的重要体外模型，为肝癌基础研究与临床转化研究提供关键实验支撑。

一、核心生物学特性

细胞来源上，QGY-7701 细胞分离自肝癌患者手术切除的原发性肝细胞癌组织，经体外多次传代建系后，持续保留肝细胞癌的组织学特征与分子表型，与正常肝细胞系（如 QSG-7701）相比，具有显著的恶性生物学优势。形态上，QGY-7701 细胞呈多边形或不规则梭形，贴壁生长时排列较松散，无正常肝细胞 “铺路石" 样的规则排列结构，细胞间隙明显；胞质丰富，部分细胞内可见大小不一的空泡（提示细胞代谢异常），细胞核大且核仁清晰，部分细胞出现多核、核染色质分布不均等异形核特征，符合肝癌细胞的典型恶性形态表现。

功能特性方面，QGY-7701 细胞具备肝癌细胞的核心恶性行为：增殖能力强，细胞周期短（约 26-32 小时），对数生长期增殖速度远高于正常肝细胞，且无接触抑制现象，细胞密度过高时可堆叠生长；具有一定的侵袭与迁移能力，能分泌基质金属蛋白酶（如 MMP-2、MMP-9）降解细胞外基质，在 Transwell 实验中可有效穿透基底膜，模拟体内肝癌细胞的侵袭转移过程；同时表达肝癌相关特异性标志物，如甲胎蛋白（AFP，阳性表达率较高）、细胞角蛋白 18（CK18）、糖链抗原 19-9（CA19-9）等，这些标志物不仅是细胞鉴定的重要依据，也为肝癌靶向实验提供了明确的作用靶点。此外，细胞基因组存在肝癌常见的分子异常，如原癌基因（MYC、EGFR）表达上调、抑癌基因（p53、PTEN）表达异?；蛲槐?，进一步贴近临床肝癌的分子病理特征。

二、体外培养关键条件

基础培养基选择以 RPMI-1640 或 DMEM（高糖）为宜，需添加 10%-12% 胎牛血清（无需额外添加激素即可维持其恶性表型，与正常肝细胞培养需求不同），以满足细胞快速增殖对营养物质的需求，同时加入 1% 无菌防护试剂预防细菌污染。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 280-320mOsm/kg，可通过添加 10mM HEPES 缓冲液增强培养基 pH 稳定性，避免因环境 pH 波动影响细胞活性与增殖。

培养环境需严格控制为 37℃、5% CO?的恒温恒湿条件，培养箱内湿度保持在 95% 以上，防止培养基因水分过度蒸发导致渗透压升高，影响细胞生长。因细胞贴壁生长且增殖速度较快，传代周期约 2-3 天，传代时需先用消化液处理（37℃孵育 1-2 分钟），待细胞边缘收缩、开始脱离培养瓶壁时，立即加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液，按 1:3-1:5 的比例接种至新的培养瓶中。需注意当细胞汇合度达到 75%-85% 时需及时传代，避免细胞过度密集导致缺氧、代谢废物堆积，进而影响细胞活力与后续实验效果。

细胞维护过程中，每日需通过倒置显微镜观察细胞生长状态：若发现细胞形态明显异常（如大量巨型细胞出现）、培养基浑浊或漂浮死细胞数量增多，需及时更换新鲜培养基或排查是否存在污染；若细胞增殖速度异常减慢，需检测胎牛血清质量或排查是否存在支原体污染。细胞冻存时，需使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）的胎牛血清作为冻存液，采用梯度降温法（4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存），减少冰晶形成对细胞的损伤；复苏时，将冻存管快速放入 37℃水浴中 1-2 分钟解冻，立即加入 5-10 倍体积的新鲜培养基稀释，降低 DMSO 毒性，复苏存活率通?？纱?75% 以上。

三、主要实验应用场景

在肝癌发病机制研究中，QGY-7701 细胞是重要的实验模型?？蒲腥嗽笨赏ü虮嗉际酰ㄈ?CRISPR-Cas9、RNA 干扰）敲除或过表达肝癌相关基因（如 p53、EGFR、MYC），观察细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的变化，明确目标基因在肝癌发生、发展中的调控作用；也可通过转录组测序、蛋白质组学分析等技术，筛选肝癌进展过程中的差异表达基因与蛋白（如 VEGF、MMPs 家族蛋白），解析肝癌细胞恶性转化的分子通路，为肝癌早期诊断寻找潜在的分子标志物。

药物筛选与敏感性测试领域，QGY-7701 细胞应用广泛?？山煌ǘ鹊母伟┲瘟葡喙匾┪铮ㄈ绨邢蛑瘟埔┪?、hua疗药物前体）作用于细胞，通过 MTT 法、CCK-8 法检测细胞活力，计算药物的半数抑制浓度（IC50），评估药物对肝癌细胞的杀伤效果；也可利用该细胞构建药物耐药细胞株，研究耐药相关基因（如 ABCB1、BCL-2）的表达变化，探究肝癌细胞产生耐药性的分子机制，为临床逆转肝癌耐药提供实验依据。此外，因细胞高表达 AFP 等肝癌标志物，可通过检测药物对这些标志物分泌量的影响，辅助评估药物对肝癌细胞恶性表型的调控作用。

在肿瘤微环境研究中，QGY-7701 细胞可用于模拟肝癌细胞与微环境成分的相互作用。通过将其与肝癌相关成纤维细胞（CAFs）、免疫细胞（如巨噬细胞、T 细胞）共培养，观察微环境细胞对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响；也可研究细胞因子（如 IL-6、TGF-β、VEGF）对肝癌细胞上皮 - 间质转化（EMT）过程的诱导作用，解析肿瘤微环境在肝癌转移中的调控机制，为开发靶向肿瘤微环境的肝癌治疗策略提供实验基础。

四、实验应用注意事项

实验前需通过免疫荧光染色、Western blot 或 ELISA 等方法验证细胞标志物（AFP、CK18）的表达水平，确保细胞恶性表型稳定，避免因传代次数过多（建议传代不超过 30 代）导致细胞表型退化，影响实验结果的可靠性；不同批次胎牛血清的成分存在差异，可能对细胞增殖速度与功能产生影响，需通过预实验筛选能维持细胞稳定生长与恶性表型的血清批次，并固定使用以保证实验结果的一致性。

贴壁细胞消化过程需严格控制消化时间与消化液浓度，避免消化过度导致细胞破裂或消化不充分影响传代效率，建议在显微镜下实时观察细胞状态，待大部分细胞脱离培养瓶壁且呈单个或小团状时，立即终止消化。操作过程中需严格遵守无菌操作规范，QGY-7701 细胞对支原体污染较为敏感，污染后易出现细胞形态异常、增殖速度减慢等问题，每传代 3-5 次需通过 PCR 法或支原体检测试剂盒检测细胞是否存在支原体污染，若发现污染需立即丢弃受污染细胞，防止交叉感染。

结果解读需结合临床肝癌的病理特征，QGY-7701 细胞虽能模拟肝癌的部分恶性表型，但体外培养环境无法wan全复制体内肿瘤微环境（如血管生成、免疫抑制状态），实验结论可能与体内实际情况存在差异，需结合动物移植瘤模型（如裸鼠荷瘤实验）或临床肝癌样本数据进行综合分析；同时，需注意与正常肝细胞系（如 QSG-7701）的对比研究，通过差异分析更精准地解析肝癌细胞的恶性机制，避免单独使用肿瘤细胞系导致实验结果片面。