IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞

一、细胞基本生物学特性

IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞源自正常大鼠小肠隐窝组织，经体外克隆筛选建立，是研究小肠上皮细胞功能、肠道黏膜屏障机制及肠道相关疾病的经典体外模型，因保留小肠隐窝上皮细胞的增殖分化特性与肠道生理功能，在消化生理学、病理学及药理学研究领域应用广泛。

形态上，该细胞呈典型上皮样形态，胞体多边形或不规则形，胞质丰富且呈淡嗜酸性，细胞间连接紧密（可见紧密连接、黏附连接结构，免疫荧光染色可检测到 ZO-1、E - 钙黏蛋白表达）；细胞核圆形或椭圆形，位于细胞中央，核仁 1-2 个，染色质分布均匀，体外培养以贴壁生长为主，呈单层 “铺路石" 样排列，具有接触抑制特性，细胞融合度达 90% 以上时增殖速率显著减缓。生长特性方面，其增殖活性中等，倍增时间约 24-36 小时，常规培养条件下可稳定传代 60 代以上，且能长期维持小肠隐窝上皮细胞的关键功能 —— 具备向小肠绒毛上皮细胞分化的潜能，在特定诱导条件（如添加丁酸钠、表皮生长因子）下，可表达小肠上皮分化标志物（如蔗糖酶 - 异麦芽糖酶、碱性磷酸酶），同时可形成功能性肠道黏膜屏障结构（跨上皮电阻值，TEER，可反映屏障完整性）。

分子表型上，该细胞高表达小肠上皮细胞特异性标志物，如细胞角蛋白 18（CK18）、紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin）、黏附分子 E - 钙黏蛋白（E-cadherin），同时表达肠道营养吸收相关蛋白（如葡萄糖转运体 SGLT1、氨基酸转运体 B?AT1）；细胞内存在肠道上皮细胞te有的信号通路（如 Wnt/β-catenin 通路，调控隐窝细胞增殖；Notch 通路，调控细胞分化），参与维持肠道上皮的自我更新与功能稳态；染色体核型为二倍体，与正常大鼠小肠隐窝上皮细胞的分子特征高度吻合，为肠道相关研究提供可靠实验基础。

二、体外培养关键条件

IEC-6 大鼠小肠隐窝上皮细胞的体外培养需精准调控营养与环境，以维持其上皮特性与肠道功能：培养基选择上，shou选 DMEM 培养基（含 4.5g/L D - 葡萄糖），需添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 谷an酰胺（或 GlutaMAX）、10μg/mL 胰岛素（促进细胞增殖与分化）及 1% 非必需氨基酸（NEAA），培养基 pH 值需控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 290-310 mOsm/kg；若开展肠道屏障功能实验，需使用无血清或低血清（2% FBS）培养基，避免血清成分干扰 TEER 检测。

培养环境需稳定在 37℃恒温、5% CO?浓度及饱和湿度，CO?浓度波动≤±0.3%，温度偏差超过 ±1℃会导致细胞贴壁能力下降，紧密连接结构破坏；需使用经过表面包被的培养器皿（如胶原蛋白 I 包被培养瓶 / 板），增强细胞贴壁能力，维持上皮形态。传代管理是培养核心：当细胞融合度达 70%-80% 时需及时传代（避免融合度过高导致接触抑制过强，影响后续增殖），操作前用无菌 PBS 清洗细胞 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液，37℃孵育 1-2 分钟至细胞边缘收缩、间隙增大，加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打（避免用力过猛破坏细胞连接）形成单细胞悬液，按 1:3-1:5 比例接种至新包被培养瓶；需注意消化时间不宜过长，否则易导致细胞活性下降。此外，细胞对血清质量敏感，需选用低内毒素（≤10 EU/mL）、批次间一致性高的 FBS，劣质血清会导致细胞分化标志物表达降低 40% 以上，甚至丢失屏障功能。

三、核心科研应用领域

依托与正常小肠隐窝上皮细胞的功能相似性，IEC-6 大鼠小肠隐窝上皮细胞在科研领域价值显著：

四、质量控制与使用注意事项

合格的 IEC-6 大鼠小肠隐窝上皮细胞需通过严格质量检测：细胞活力≥92%（台盼蓝染色法）；无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法或培养法检测阴性）；免疫表型符合 CK18?ZO-1?E-cadherin?特征（免疫荧光或 Western Blot 验证）；屏障功能达标（单层培养 TEER 值≥200 Ω?cm2，荧光su钠通透性≤1×10?? cm/s）；分化能力正常（诱导后碱性磷酸酶活性升高 2 倍以上）；增殖速率稳定（倍增时间 24-36 小时）；染色体核型为正常二倍体（提供检测报告）。

使用时需注意：传代次数控制在 50 代内，超过传代上限可能导致细胞分化能力下降、屏障功能减弱；开展屏障功能实验前，需将细胞接种至 Transwell 小室，培养 7-10 天至形成稳定单层（TEER 值稳定）；细胞冻存需使用含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM 专用冻存液，采用梯度降温法（4℃ 30 分钟→-20℃ 2 小时→-80℃过夜→液氮保存），复苏时需在 37℃水浴中 1 分钟内快速融化，离心去除冻存液后接种至包被培养瓶，静置 48 小时待细胞wan全恢复贴壁与功能后再开展实验；进行药物处理或损伤实验时，需设置空白对照组与溶剂对照组，每组至少 3 个复孔，减少实验误差，保证结果可靠性。