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更新时间：2025-10-29
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ND7/23大鼠/小鼠神经元融合细胞
ND7/23大鼠/小鼠神经元融合细胞是神经科学领域du具特色的杂交细胞模型，通过细胞融合技术将大鼠背根神经节细胞（具成熟神经元功能）与小鼠神经母细胞瘤细胞（具稳定增殖特性）融合构建而成。该细胞兼具亲本细胞优势：既保留背根神经节细胞的神经元特异性功能，又继承神经母细胞瘤细胞的体外培养适应性，无需复杂诱导即可维持神经表型，成为神经痛机制研究、神经毒性评估及神经相关药物筛选的核心实验载体，为基础神经科学与临床转化研究提供重要支撑。
一、核心生物学特性
（一）融合来源与细胞属性
ND7/23 细胞的融合特性赋予其独特研究价值：亲本大鼠背根神经节细胞源自外周神经系统，负责传递感觉信号（尤其是痛觉信号），具备神经元成熟功能；小鼠神经母细胞瘤细胞则拥有无限增殖能力与体外培养稳定性，二者融合后，ND7/23 细胞不仅能长期稳定传代（50 代以内功能无显著退化），还能模拟背根神经节细胞的感觉神经功能，* “原代神经元难培养" 与 “纯肿瘤细胞功能单一" 的研究空白，尤其适合外周神经相关研究。
（二）形态与生长特征
体外培养时，ND7/23 细胞以贴壁生长为主，细胞形态呈典型神经元样特征：多数细胞呈梭形或多极形，胞质丰富，部分细胞伸出 1-3 条细长的神经突起（轴突样结构），长度可达细胞体直径的 5-8 倍，突起末端可见细小分支，模拟神经元的信号传递结构；细胞核呈椭圆形，位于细胞体中央，核仁清晰（1 个），染色质分布均匀，分裂象较神经母细胞瘤细胞少（倍增时间约 36-48 小时），体现部分成熟神经元的生长特性。
细胞接种密度需精准控制：常规以 4×10?-6×10? cells/cm2 接种，接种后 18-24 小时贴壁率达 85% 以上，48-72 小时进入对数生长期，72-96 小时汇合度达 80%-85%，此时需及时传代，避免过度汇合导致神经突起断裂或功能退化。
（三）分子表型与功能特性
分子层面，ND7/23 细胞呈现特异性神经表型：一是高表达背根神经节细胞相关标志物，如降钙素基因相关肽（CGRP，痛觉信号传递关键分子）、P 物质（SP，感觉神经递质），阳性率均达 80% 以上，可通过免疫荧光或 ELISA 验证；二是表达神经元通用标志物，如微管相关蛋白 2（MAP2，神经元骨架蛋白）、神经元特异性烯醇化酶（NSE），阳性率达 90% 以上，确认细胞神经属性；三是表达痛觉相关受体，如 TRPV1（辣椒素受体，介导痛觉信号）、P2X3（嘌呤受体，参与痛觉传递），这些受体的表达是其用于神经痛研究的核心基础。
功能上，ND7/23 细胞具备丰富神经功能：一是神经递质分泌功能，可合成并分泌 CGRP、SP 等感觉神经递质，分泌量受痛觉刺激（如辣椒素）调控，刺激后分泌量可升高 3-5 倍，适合神经痛信号传导研究；二是痛觉相关信号响应能力，暴露于痛觉诱导物质（如缓激肽、组胺）时，细胞内钙离子浓度显著升高（可通过荧光钙成像检测），模拟体内痛觉信号激活过程；三是神经电生理活性，部分细胞可记录到自发性动作电位，添加神经递质后电信号频率显著变化，体现神经元的信号传递功能。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
ND7/23 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持神经功能：
培养基选择：优先使用DMEM/F12 混合培养基（1:1 比例），含丰富氨基酸与微量元素，能更好支持神经元样细胞生长；若使用纯 DMEM 培养基，需额外添加 1% 非必需氨基酸，否则细胞神经突起形成率下降 20% 以上；
血清与添加剂：添加 10% 胎牛血清（需筛选低内毒素批次，避免刺激神经细胞），加入 1% 抗菌试剂预防污染；无需添加生长因子，细胞可通过自分泌维持神经表型，若需增强神经突起生长，可添加 5ng/mL 神经营养素 3（NT-3），促进突起伸长；
培养环境：温度 37℃±0.5℃，CO?浓度 5%±0.2%，湿度 95%±2%，pH 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通培养瓶（无需涂层，细胞贴壁能力较强），每 2-3 天更换一次培养基，更换时保留 1/5 旧培养基，减少环境波动对神经功能的影响。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：细胞汇合度达 80%-85% 时传代（每 3-4 天一次），避免过度汇合导致神经突起损伤。传代比例按 1:2-1:3 稀释，稀释比例不宜过高（低于 1:4 易导致细胞密度过低，影响神经突起生长）。
传代步骤：
弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次（神经突起较脆弱，避免反复冲洗）；
加入含 0.02% EDTA 的消化液（25cm2 培养瓶加 1mL），37℃孵育 1.5-2 分钟（细胞贴壁力中等，消化时间需严格控制），镜下见细胞边缘收缩、神经突起回缩时，立即加入 2 倍体积含血清培养基终止消化；
用移液器轻轻吹打（力度轻柔，避免破坏细胞体），使细胞wan全脱落并分散为单个细胞，离心（800×g，5 分钟）后用新鲜培养基重悬，按比例接种新瓶。
功能维持要点：长期传代易导致痛觉相关受体表达下降，需每 8-10 代检测 TRPV1、P2X3 表达（阳性率需≥70%）；若表达下降，可在培养基中添加 100nM 辣椒素（轻度激活痛觉信号通路）培养 24 小时，促进受体表达恢复；同时避免频繁冻存复苏，每次复苏后传代 2-3 代，待细胞神经突起生长稳定后再用于实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、神经突起正常的细胞（活力≥90%，突起形成率≥60%），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% DMEM/F12 培养基" 配制，冰浴操作，DMSO 缓慢滴加，边加边轻轻混匀，防止细胞渗透压骤变。
冻存流程：消化离心后重悬细胞，调整浓度为 6×10?-8×10? cells/mL，分装冻存管（每管 1mL）；程序降温：4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃12 小时→液氮保存，不可直接放入 - 80℃（易导致神经突起结冰损伤）。
复苏操作：从液氮取出后，立即 37℃水浴快速解冻（40-60 秒融化），迅速将细胞悬液加入 10 倍体积预热培养基，轻轻混匀后离心（800×g，5 分钟）去 DMSO；用新鲜培养基重悬接种，培养 24 小时后更换培养基，复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 85% 以上，72 小时后神经突起开始重新生长，一周后可正?？构δ苁笛椤?/span>
三、主要研究应用场景
（一）神经痛机制研究
ND7/23 细胞因表达痛觉相关受体，是解析神经痛机制的理想工具：
痛觉信号通路研究：通过添加痛觉刺激物质（如辣椒素、缓激肽），检测细胞内钙离子浓度变化（荧光钙成像）、CGRP/SP 分泌量（ELISA），分析 TRPV1-PLC-IP3 等痛觉信号通路的激活情况；例如，抑制 PLC 活性后，辣椒素诱导的钙离子升高幅度下降 60%，证实该通路在痛觉信号传递中的关键作用；
病理性神经痛模型构建：将细胞暴露于神经损伤模拟物质（如紫shan醇、高糖），诱导 TRPV1、P2X3 受体过度表达，构建体外神经痛模型；检测模型细胞中痛觉相关分子的表达变化，为病理性神经痛机制研究提供依据。
（二）神经毒性评估与药物筛选
依托神经敏感性，该细胞广泛用于神经毒性评估与药物研发：
神经毒性评估：将环境污染物（如重金属铅、有机磷农药）、药物候选化合物与细胞共培养，检测细胞活力（CCK-8 法）、神经突起长度、CGRP 分泌量，评估物质对感觉神经的毒性；例如，铅处理后，细胞神经突起长度缩短 40%，CGRP 分泌减少 35%，可量化评估其神经毒性；
镇痛药物筛选：将候选镇痛药物（如 TRPV1 拮抗剂、P2X3 抑制剂）与细胞共培养，检测药物对痛觉刺激诱导的钙离子升高、CGRP 分泌的抑制效果，筛选高效镇痛药物；例如，某 TRPV1 拮抗剂处理后，辣椒素诱导的钙离子升高幅度下降 50%，提示其潜在镇痛价值。
（三）神经电生理与信号传递研究
ND7/23 细胞的电生理活性使其适用于神经信号传递研究：
离子通道功能研究：通过膜片钳技术记录细胞的钠电流、钾电流，分析痛觉相关离子通道（如 TRPV1）的电生理特性；添加通道调节剂（如辣椒素激活 TRPV1），观察电流变化，明确通道功能对神经电信号的影响；
神经递质作用机制研究：将神经递质（如 SP、CGRP）与细胞共培养，检测细胞电信号频率、钙离子浓度变化，研究神经递质对感觉神经细胞的调控作用，为神经递质紊乱相关疾病（如神jing病理性疼痛）的研究提供模型支持。
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